說(shuō)說(shuō)蛋白質(zhì)聚集體可以做哪些檢測呢

　　蛋白質(zhì)聚集體是蛋白類(lèi)藥物研發(fā)和商業(yè)化過(guò)程中一個(gè)重要的挑戰之一。聚集體在蛋白質(zhì)產(chǎn)品開(kāi)發(fā)和生產(chǎn)過(guò)程的所有階段都可以觀(guān)察到，如蛋白表達、純化、凍干等?？赡軐Ξa(chǎn)品的質(zhì)量和功效有顯著(zhù)的負面影響，其通常會(huì )減弱蛋白生物活性。此外蛋白聚集體可能存在潛在增強免疫原性的風(fēng)險。
 

　　蛋白質(zhì)聚集體的積累是許多神經(jīng)退休性疾病的共同病理特征，并且與老化也密切相關(guān)。然而我們還不了解聚集體是怎樣形成和如何清除的；以及在它們的清除中，分子伴侶、蛋白酶和其它調控因子的復雜網(wǎng)絡(luò )是怎樣形成的。
 

　　很多研究運用有力的干擾，比如熱休克或蛋白酶抑制產(chǎn)生聚集體。然而這些壓力是非常強的而且是非特異性的，會(huì )引起全局細胞應激反應和無(wú)關(guān)蛋白聚集。另外有人運用對polyQ融合突變的亨廷頓蛋白的遺傳干擾進(jìn)行聚集體研究。盡管有較高的特異性，但這些系統顯示對于聚集開(kāi)始的時(shí)間和聚集形成的程度控制性很差。
 

　　蛋白質(zhì)聚集體的檢測
 

　　1.可溶聚集體
 

　　最小的可溶聚集體是二聚體，可溶聚集體的大小上限則因蛋白質(zhì)和溶液條件而異。這些可溶的蛋白聚集體，無(wú)論是通過(guò)物理相互作用還是化學(xué)修飾，通?？梢杂肧EC-HPLC檢測。該方法的局限在于樣品在層析柱中的稀釋可能會(huì )導致聚集體的解離、不同蛋白質(zhì)需要不同的流動(dòng)相、同時(shí)流動(dòng)相或高壓也可能會(huì )誘導蛋白質(zhì)形成聚集體。
 

　　除此之外，其他的一些可以檢測蛋白質(zhì)聚集體的方法有原位動(dòng)態(tài)光散射、原位靜態(tài)光散射、分析超離心法、原子力顯微鏡、石英晶體微天平、電噴霧-差分電遷移率分析等。
 

　　2.不可溶聚集體
 

　　一般來(lái)說(shuō)，不可溶聚集體包括亞可見(jiàn)微粒(<100μm)和各種形式的可見(jiàn)聚集體或顆粒?？梢?jiàn)顆粒體/聚體的形貌取決于聚集機制和或實(shí)驗條件(如溶液pH)。
 

　　傳統的檢測亞可見(jiàn)微粒的方法是光屏蔽法，但其在檢測半透明顆粒和特征尺寸小于2μm的顆粒方面能力有限。流動(dòng)成像分析因為其高的靈敏度、形態(tài)信息及可區分某些類(lèi)型的顆粒而被廣泛應用于聚集體的檢測。