簡(jiǎn)單介紹一下振動(dòng)圓二色測試的注意事項

　　振動(dòng)圓二色是應用較為廣泛的測定蛋白質(zhì)二級結構的方法，是研究稀溶液中蛋白質(zhì)構象的一種快速、簡(jiǎn)單、較的方法。它可以在溶液狀態(tài)下測定，較接近其生理狀態(tài)。而且測定方法快速簡(jiǎn)便，對構象變化靈敏，所以它是目前研究蛋白質(zhì)二級結構的主要手段之一，并已廣泛應用于蛋白質(zhì)的構象研究中。用于推斷非對稱(chēng)分子的構型和構象的一種旋光光譜。光學(xué)活性物質(zhì)對組成平面偏振光的左旋和右旋圓偏振光的吸收系數(ε)是不相等的，εL≠εR，即具有圓二色性。如果以不同波長(cháng)的平面偏振光的波長(cháng)λ為橫坐標，以吸收系數之差Δε=εL-εR為縱坐標作圖，得到的圖譜即是圓二色光譜，簡(jiǎn)稱(chēng)CD。如果某手性化合物在紫外可見(jiàn)區域有吸收，就可以得到具有特征的圓二色光譜。由于εL≠εR，透射光不再是平面偏振光，而是橢圓偏振光，摩爾橢圓度[θ]與Δε的關(guān)系為：[θ]=3300Δε。振動(dòng)圓二色也可以摩爾橢圓度為縱坐標，以波長(cháng)為橫坐標作圖。由于△ε有正值和負值之分，所以也有呈峰的正性圓二色譜和呈谷的負性圓二色譜。在紫外可見(jiàn)光區域測定與旋光譜，其目的是推斷有機化合物的構型和構象。
 

　　振動(dòng)圓二色測試事項
 

　　(1)在標準操作時(shí)，譜帶寬度選為1nm。對于高分辨率測量，要用較窄的狹縫寬度，此時(shí)光電倍增管的電壓較高，譜的信噪比差。雖然對于正常測量較佳譜帶寬度是1~2nm，但是在下列情況下要犧牲分辨率而需要較寬的狹縫寬度。當樣品的吸光度很高但CD信號很弱時(shí)，一方面要盡量測定CD峰所需要的足夠濃度，另一方面要設置較寬的狹縫。不過(guò)此時(shí)要特別小心，因為樣品在吸光度過(guò)高(A>2)的情況下可能存在熒光或雜散光引起的某些假象。另外，在固體CD光譜測試時(shí)也需要較大的狹縫寬度(一般要求>2nm)。
 

　　(2)橢圓率和摩爾橢圓率都依賴(lài)于測量條件。因此，溫度、波長(cháng)和樣品濃度總是應該特別注明的。
 

　　(3)當用壓片法或石蠟油研磨法進(jìn)行固體粉末樣品測試時(shí)，要盡可能地研磨獲得細小均勻的樣品顆粒。采用石蠟油糊方法時(shí)，必須注意某些憎水有機化合物可能溶于石蠟油中，這時(shí)所得CD光譜在某種意義上應視為溶液CD光譜。采用壓片法測試固體CD時(shí)，在手性樣品的定性濃度達到CD光譜儀檢測要求的同時(shí)，片越薄越透明越好(但切忌破損)。在某些情況下，壓片法不適用于手性抗衡陰離子存在下的固體誘導CD光譜的測定。